实验题 某同学从大肠杆菌中提取质粒DNA时,得到了线状和超螺旋两种形态的DNA。若采用密度梯度离心法分离这两种形态的DNA,请简要写出实验原理、预测并分析实验结果。
【正确答案】密度梯度离心法是指将样品装在具有惰性介质的离心管介质表面或者与介质混合,通过离心,样品中各组分颗粒依据沉降系数或者密度最后停留在离心管介质相应位置并形成区带的分离方法。 (1)原理:核酸密度梯度离心最常用的梯度介质是氯化铯(CsCl)或者蔗糖。一般分离DNA用氯化铯介质,将样品和介质混合在一起进行超速离心;随着介质在离心过程中形成自下而上的密度梯度,核酸分子通过上浮或下沉形成条带,稳定存在于等密度介质中。不同核酸分子大小、形状、密度不同,则条带形成和存在的位置不同,因而得以分离。 (2)实验结果预测及分析:当进行密度梯度离心时,由于超螺旋DNA密度大,离心后会在靠近离心管底部的位置形成区带,而线状DNA密度小,会在靠离心管开口端的位置形成区带,如此就可以将两者分开了。
【答案解析】[考点] 密度梯度离心法的原理。