原核生物的DNA聚合酶有三种，分别命名为DNA聚合酶I、DNA聚合酶Ⅱ、DNA聚合酶Ⅲ。三种DNA聚合酶均有5＇→3＇聚合活性和3＇→5＇核酸外切酶活性，可以催化DNA子链从5＇→3＇方向合成、识别合成过程中错配的DNA并进行剪切。DNA聚合酶I还具有5＇→3＇外切酶活性，其主要功能是复制过程中校读、修复、填补缺口。DNA—PolⅢ是原核生物复制延长中真正起催化作用的酶。