利用经典的Edman降解法直接测定多肽链氨基酸顺序时,通常需要对多肽链进行专一性有限水解,而且需要选择两种以上水解方法。请分析其原因,并给出2种具体方法。
 
【正确答案】[答题要点] 基于Edman原理进行测序,多肽链长度一般不宜超过50个氨基酸残基。因为,假定反应正确率为98%,那么,测定60个反应循环后,0.9860=0.3。此时,能正确发生反应的分子不到1/3。可见,如果多肽链太长,会影响测序结果的可靠性。对长的多肽链进行专一性有限水解,分离出小肽段再进行测序,才能保证结果的准确度。 要获悉整个多肽链的氨基酸顺序,需要将小肽段拼接。只有一套小肽段是无法完成拼接的,只有利用2种以上方法在多肽链不同位点进行专一性有限水解,由此获得两套以上小肽段,才能利用重叠区拼出整个序列。 方法:如胰蛋白酶——用于专门水解由赖氨酸或精氨酸的羧基形成的肽键;胰凝乳蛋白酶——用于专门水解由芳香族(或具有大的疏水侧链)氨基酸的羧基形成的肽键。
【答案解析】[考点] 蛋白质序列测定策略。