有一个蛋白质干粉样品,具有水溶性。请设计一个实验流程来证明该样品是否纯,并阐述基本原理。
 
【正确答案】[答题要点] (1)用缓冲液将蛋白质干粉在低温下(通常4℃)溶解。(原理:蛋白质为生物大分子,溶液变性降解。缓冲液、低温对蛋白质有保护作用,保证多肽链不被很快破坏)。 (2)将蛋白质溶液制成SDS-样品,进行SDS-PAGE分析。(原理:SDS-PAGE是变性电泳,可以用来鉴定蛋白质纯度。如果电泳结果是一条带,证明样品纯度达到电泳纯;如果SDS-PAGE结果出现2个以上条带,则显示两种可能性:或者是样品为单一蛋白,但由多亚基组成;或者是样品不纯,含有多种蛋白。需要进一步鉴定)。 (3)将蛋白质溶液制成活性样品,然后利用PAGE分析蛋白质条带(原理:PAGE为非变性电泳,多亚基纯蛋白应该为1条带;如果电泳结果为多条,则证明不纯)。
【答案解析】[考点] 蛋白质性质与鉴定。 蛋白质是生物大分子,在分离、分析过程中,要结合实验目的严格控制条件。高温、极端pH等容易破坏蛋白质,对这种样品进行SDS-PAGE分析,即便是很纯的单亚基蛋白也有可能出现多条带。相反,对于天然结构完整的蛋白质,即使SDS-PAGE出现多条带,也不能下结论说不纯,因为有些蛋白质天然结构本来就是多亚基的,在这种情况下,需要结合其他技术进行验证。