酵母双杂交技术是利用其什么特点建立起来的?在科学研究中有什么作用?
 
【正确答案】(1)酵母双杂交技术的建立依据 酵母双杂交技术是利用真核生物转录调控因子的组件式特点建立的。 真核生物基因转录需要反式转录激活因子的参与,转录激活因子含有两个不同的结构域:N端的DNA结合结构域(BD)和C端的转录激活结构域(AD),这两个结构域各具功能,互不影响,单独存在时没有转录激活的功能,只有两者通过共价或非共价键连接建立空间结构才能表现出一个完整的激活特定基因表达的激活因子的功能。 例如:完整酵母的转录激活因子GAL4含有两个结构域,位于N端的1~147位氨基酸残基组成的DNA结合结构域,C端的768~881位氨基酸残基组成的转录激活域,GAL4分子的DNA结合结构域可以和上游激活序列(UAS)结合,而转录激活域则能激活UAS下游的基因进行转录。单独的DNA结合结构域不能激活基因转录,单独的转录激活域也不能激活UAS的下游基因,它们之间只有通过某种方式结合在一起才具有完整的转录激活因子的功能。酵母双杂交技术正是利用了GAL4的功能特点,通过两个杂交蛋白在酵母细胞中的相互结合以及对报告基因的转录激活来捕获新的蛋白质。 (2)酵母双杂交技术在科学研究中的作用 ①能够有效地分离与一种已知的靶蛋白相互作用的蛋白质的编码基因; ②主要用于研究蛋白质之间的相互作用; ③寻找在蛋白质一蛋白质相互作用中起关键作用的结构域; ④寻找与靶蛋白相互作用的新蛋白; ⑤用于建立基因组蛋白连锁图; ⑥用于疾病发生机制的研究和药物的开发。
【答案解析】