结构推理 何为免疫印迹法,其基本原理、方法及临床应用如何?
【正确答案】免疫印迹法亦称酶联免疫电转移印斑法,亦称为Westernblot。免疫印迹法是由十二烷基磺酸钠一聚苯烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),蛋白质转运和酶免疫测定三项技术结合而成。其基本原理是蛋白质样品经SDS-PAGE,其中的抗原按分子量及带电荷量大小不同而被分离,通过转移电泳原位转印至固相介质(如NC)上,并保持生物学活性,然后用酶免疫测定进行特异性检测。其方法分三阶段进行:首先抗原等蛋白质样品经SDS处理后带负电荷,在聚丙烯酰胺凝胶电泳时从阴极向阳极泳动,分子量小者,泳动速度快。然后将凝胶中已经分离的蛋白质条精在电场作用下转移至N上;最后用酶免疫测定法进行检测。本法综合了SDS-PAGE的高分辨力和ELISA法的高特异性及敏感性,广泛用于分析抗原组分及其免疫活性,也可用于疾病的诊断。
【答案解析】