【正确答案】(1)细胞凋亡与细胞坏死的区别 (2)细胞凋亡常用的研究方法 ①形态学观察 a.台盼蓝染色法 台盼蓝无法进入活细胞,但可使死细胞着色。 b.4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法 DAPI是一种能与DNA结合的荧光染料,可以染细胞核,借助荧光显微镜,可以观察到细胞核的形态变化。 c.吉姆萨(Giemsa)染色法 吉姆萨可以使染色质着色,便于在普通光学显微镜下观察到染色质固缩、趋边化、凋亡小体的形成等凋亡过程。 ②DNA电泳 细胞凋亡时,染色质DNA在核小体间被特异性切割,降解成180~200bp或其整数倍片段,提取的DNA在进行琼脂糖凝胶电泳时,呈现出梯状条带。 ③DNA断裂的原位末端标记法 凋亡细胞的核DNA断裂后产生3′-OH末端,可借助一种可观测的标记物如荧光素对单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色,用荧光显微镜进行观察;而正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3′-OH形成,很少能够被染色。 ④彗星电泳法 彗星电泳法是指将单个细胞悬浮于琼脂糖凝胶中,经裂解处理后,再在电场中进行短时间的电泳,并用荧光染料染色来鉴定细胞凋亡的方法。凋亡细胞中的DNA降解片段,在电场中泳动速度较快,使细胞核呈现出一种彗星式的图案,而正常的无DNA断裂的核在泳动时保持圆球形。 ⑤流式细胞分析 凋亡细胞DNA发生断裂和丢失,呈亚二倍体状态;采用碘化丙啶染色使DNA产生激发荧光,流式细胞仪能够检测出凋亡的亚二倍体细胞。 ⑥检测细胞膜成分变化 细胞凋亡早期,位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸翻转至细胞膜外侧,可以用针对磷脂酰丝氨酸的荧光标记探针进行检测。 ⑦其他的生理生化方法 检测caspases的激活、Cyt c的释放、线粒体膜电位的变化等。
【答案解析】