【正确答案】Southern杂交技术是一种核酸分子杂交技术,用于鉴定特定的重组DNA克隆。其基本原理为:(1)制备特定的DNA探针或RNA探针。探针是具有一定已知序列的核酸片段,探针与被探测的DNA对象即目的基因具有互补的序列,带有放射性的或荧光的探测标记。(2)含有目的基因的重组DNA分子与具有同源序列的探针实现杂交,杂交条件是重组DNA的变性和复性。DNA水溶液在100℃,或pH≥13的条件下,能够由双链变为两个单链,这个过程称为变性。变性的DNA在65℃或酸性条件下,又恢复为双链,这个过程称为复性。在复性过程中,探针能够与同源的DNA序列因为碱基互补而配成双链,因而能在分子杂交中通过退火形成双链而产生杂交信号,显示被探测DNA的质和量。
操作方法:首先将受体基因组DNA用限制酶切成片段,并用琼脂糖凝胶电泳等方法分离这些片段。接着,通过碱处理使凝胶中的DNA变性成为单链,并将这些单链吸印到硝酸纤维素或尼龙衍生物制成的滤膜上。然后,在杂交液中将放射性标记过的目的基因的探针同这些变性DNA做分子杂交,最后通过放射自显影直接观察。胶片上的杂交条带显示相应受体含有目的基因。
【答案解析】