【正确答案】原核生物病害分离培养多采用稀释分离法和平板划线分离培养法。其主要步骤如下所述。
   (1)稀释分离法：该方法可分为两种类型。
   第一种类型为混合平板分离法：分离时，在新的病斑边缘挑取少量病组织在无菌水试管中配成菌悬液，取灭菌培养皿3套，标好次序，其内各置无菌水1ml，用移置环移取菌悬液一环，放在第1皿水中混合均匀，从中挑取一环稀释液至第2皿，再以同法稀释成第3皿，取熔化后冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨培养基，每呲约倒20ml，摇匀，铺平，凝固后倒置于26～28℃的温箱中培养，1～2d后可见白色、圆形或近圆形直径为1～2mm的菌落。
   第二种类型为涂布平板分离：即不是将上述菌悬液与培养基混合，而是先将培养基制作成平板后，再取100μl左右的菌悬液，用玻璃三角架涂布于平板表面，其他操作同第一种类型。用移置环挑取长出的典型菌落移入牛肉膏蛋白胨斜面培养基上培养，每组转4～6管，注意过早出现的大型菌落多为腐生细菌。
   (2)平板划线分离培养法：取新鲜病叶，在病健交接处取几小块病组织，以洁净水多次淋洗，洗净表面杂物，再置于75/%乙醇中1～3min，取出病组织，用无菌水清洗3次后，放在比色板或凹玻片的凹窝内(凹窝要经两次酒精火焰消毒)，以吸管吸取无菌水滴入凹窝，并以灭菌的玻璃棒捣碎病组织，静置几分钟可得菌悬液。取两套牛肉膏蛋白胨培养基平板，然后用移置环蘸取一环稀释好的菌悬液，在第一个培养皿平面培养基的左方长方形区内划平行线5～7条，再以此移置环继续向右划5～7条平行线，依此法划两皿，倒置于26～28℃温箱中培养，1～2d后挑单个典型菌落移到斜面培养基上，培养待用。通过划线，将混杂的细菌在平板表面逐一分散，经培养后，各自形成菌落。根据菌落形态、特征挑选单个菌落，移种培养后，即得到纯种细菌。
   在自然状况下，病原菌是和其他杂菌混生在一起的，病原菌成功的分离培养能获得纯培养物，但只有在完成柯赫氏法则后，才能鉴定新的原核病原物和诊断其分类学归属。