问答题 试述PCR的引物设计原则。
【正确答案】①引物长度要求有15~30个核苷酸。②引物中G+C含量通常为40%~60%。③4种碱基应随机分布,在3'-末端不应有连续的3个G或C。④引物自身不应存在互补序列而引起自身折叠。⑤两引物间不应存在多于4个连续碱基有互补性,以免产生引物二聚体。⑥引物与非特异性靶区之间的同源性不要超过70%或有连续8个互补碱基同源。⑦引物3'-末端是引发延伸的点,因此不应错配。⑧引物5'-末端对扩增特异性影响不大,可以修饰。
【答案解析】