【正确答案】基因扩增(gene amplification)为一特异蛋白质编码的基因的拷贝数选择性地增加而其他基因并未按比例增加的过程。在自然条件下,基因扩增是通过从染色体切除基因的重复序列再在质粒中进行染色体外复制或通过将核糖体RNA的全部重复序列生成RNA转录物再转录生成原来DNA分子的额外拷贝而实现的。在实验室已建立了不等交换、从裂解细胞提取DNA或经过滚环复制生成染色体外序列进行人工基因扩增。
PCR即多聚酶链式反应(polymerase chain reaction),是1985年美国Cetus公司和加利福尼亚大学的有关研究人员创建的一项生物技术。PCR原理类似于天然DNA的复制,主要是利用DNA多聚酶依赖于DNA模板的特性,模仿体内的复制工程,在附加的一对引物之间诱发聚合反应。其基本过程是基于一套“三部曲”的若干次的循环组合而成,其中每一步的转换则是通过温度的改变来控制的。待增加拷贝数的DNA片段经热变性成为单链后,与寡聚核苷酸引物退火,然后加入耐高温的DNA多聚酶,以DNA单链为模板合成一条新的DNA。再高温解链,由于反应体系中有引物和耐高温的DNA多聚酶,所以又开始第二轮合成。这样经过许多次重复进行DNA合成,DNA顺序的拷贝数就可以大量增加。PCR技术的应用范围甚广,在基础研究方面已应用于分子生物学、病毒学、动物学、古生物学、人类学等学科的研究,在应用方面已遍及遗传病的产前诊断,早期胎儿的性别鉴定,潜伏性病毒和癌变的检测、传染病的诊断、司法和犯罪侦查等领域。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。
【答案解析】