问答题 1967年,有五个实验室几乎同时独立发现了DNA连接酶,每个实验室的实验有什么特点?
【正确答案】这五个实验的特点是:
   (1)λ噬菌体DNA的连接实验。
   λ噬菌体DNA具有天然的黏性末端,它们能够自行成为环状双链的DNA分子,在宿主细胞中由宿主DNA连接酶将环状双链中的缺口封闭,形成共价闭合的双链。在体外形成的环状双链DNA不经DNA连接酶连接是不完整的,这种DNA在碱性蔗糖梯度离心时要解链,而共价闭合的环状DNA不会解链,沉降速度较快。
   (2)人工合成的多聚核苷酸连接实验。
   将人工合成的多聚dA4000与32P标记的dT150通过碱基互补配对形成双链,用连接酶处理后再用磷酸单酯酶处理,没有游离的32Pi释放出来,对照组则有游离的32Pi释放。
   (3)在体外将同纤维素结合的寡聚dC、32P标记的寡聚dC同多聚dI在中性条件下形成复性复合物,用DNA连接酶处理后,再用NaOH处理,离心后分离纤维素。用连接酶处理过的放射标记的寡聚dC同纤维素结合在一起,而对照组32P标记的寡聚dC则要与纤维素分开。
   (4)外切核酸酶Ⅲ切割实验。
   用DNA连接酶连接3H标记的多聚d[AT]缺口,然后用核酸外切酶Ⅲ处理,没有游离的放射性单核苷酸释放,而对照组则有。
   (5)DNA转化实验。
   用DNase处理使DNA失去转化活性,而用连接酶处理能够恢复有缺口DNA的转化活性。
【答案解析】