【正确答案】(1)基因定点的基本原理 通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(基因组或质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化)，包括碱基的添加、删除、点突变等。目前，主要采用两种PCR方法，重叠延伸技术和大引物诱变法，在基因序列中进行定点突变。 (2)基因定点的实验过程 采用的方法不同，实验过程也不同。 ①重叠延伸技术 a.将模板DNA分别与引物对1(正向诱变引物FM和反向引物R2)和2(正向引物F2和反向诱变引物RM)退火，通过PCR1和PCR2反应扩增出两种靶基因片段； b.FMR2和RMF2片段在重叠区发生退火，用DNA聚合酶补平缺口，形成全长双链DNA，进行PCR3扩增； c.用引物F2和R2扩增出带有突变位点的全长DNA片段(PCR4)。 ②大引物诱变法 a.用正向突变引物(M)和反向引物(R1)，扩增模板DNA产生双链大引物(PCR1)，与野生型DNA分子混合后退火并使之复性； b.第二轮PCR中加入正向引物(F2)，与PCR1中产生的一条互补链配对，扩增产生带有突变的双链DNA； c.进行DNA序列分析验证突变位点。