问答题
你想把一段cDNA克隆到一表达载体上，这样便能在E.coli中大量生产该蛋白。cDNA是BamHI切下的片段，准备将其插入到载体的BamHI位点上，这次是你首次做克隆，因而严格遵照指南上的步骤。
首先你得切载体DNA，且用碱性磷酸酶去除5'-磷。第二步，把处理过的载体与BamHI切出的cDNA片段混合加入连接酶后温育，连接后将它与感受态细胞混合。最后，将混合物涂布在含抗生素的固体培养基上，杀死所有未转入载体的细胞，而转入了载体的细胞由于其抗生素抗性而存活下来。
克隆手册上提到了四种对照：①未和连接混合物混合的细菌涂平板；②转入未切过的载体的细胞涂平板；③酶切过但未用碱性磷酸酶去除5'-磷的载体，未加外源cDNA片段但加连接酶温育的混合物与感受态细胞混合涂平板；④载体酶切过，碱性磷酸酶处理过，无cDNA片段加连接酶温育后和感受态细胞混合涂平板。
第一次做该实验的实验组和四个对照组借用同宗的感受态细胞，但所有平板上菌落太多而无法数清(见表16-3-40)。第二次做时，采用自己准备的细胞，但没有一个平板上有菌落长出。你又做了一次，这次的结果见表16-3-40。你从样品中挑了几个菌落，提取质粒DNA后用BamHI处理，有九个菌落生成和线状载体相同大小的一条带，但另三个菌落含有你需要克隆的cDNA片段。
表16-3-40 Results of Your cDNA Cloning Endeavor
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| | 样品制备 | 实验结果 |
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| 1 | 2 | 3 |
对照1
对照2
对照3
对照4
实验样品 | 只有细胞
未切的载体
无磷酸化酶、无cDNA
无cDNA | TMTC
TMTC
TMTC
TMTC
TMTC | 0
0
0
0
0 | 0
＞1000
435
25
34 |
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| TMTC=too many to count | | | |