在基因操作实践中有哪些检测核酸和蛋白质相对分子质量的方法?
 
【正确答案】在基因操作实践中检测核酸和蛋白质相对分子质量的方法包括凝胶电泳技术、双向电泳技术和质谱分析技术。 (1)凝胶电泳技术 将被测物(蛋白质或核酸)放置到特定的电场中,它就会以一定的速度向适当的电极移动,其迁移率与电场强度和该分子本身携带的净电荷数成正比。由于凝胶为无反应活性的稳定的支持介质,从而降低了对流速度,因此迁移率又与分子的摩擦系数成反比。已知摩擦系数是相对分子质量大小、极性、介质粘度的函数,根据分子大小的不同、构型或形状的差异以及所带的净电荷的多寡,即可通过电泳将蛋白质或核酸分子混合物中的各种成分彼此分离开来。 (2)双向电泳技术 双向电泳技术是分离大量混合蛋白质组分最有效的方法,依赖于蛋白质的等电点和相对分子质量。运用等电聚焦(IEF)和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,在电流的作用下,在以两性电解质为介质的电泳体系中,不同等电点的蛋白质会聚集在介质上不同的区域(等电点)从而被分离。蛋白质的相对分子质量决定SDS-蛋白质复合物在凝胶电泳中的迁移率,因此蛋白质在SDS凝胶电场中的运动速率(速率与相对分子质量成反比)和距离完全取决于其相对分子质量而不受其所带电荷的影响,不同相对分子质量的蛋白质将位于凝胶的不同区段而得到分离。 (3)质谱分析技术 质谱分析技术是一种超灵敏的鉴定技术,是在高真空系统中测定样品的分子、离子及碎片离子质量,以确定样品相对分子质量和分子结构的技术。基本原理:将试样中各组分电离生成不同质荷比的离子,经加速电场的作用,形成离子束,进入质量分析器,利用电场和磁场使发生相反的速度色散——离子束中速度较慢的离子通过电场后偏转大,速度快的偏转小;在磁场中离子发生角速度矢量相反的偏转;当电场和磁场的偏转作用彼此补偿时,二者的轨道便相交于一点。同时,在磁场中还能发生质量的分离,使具有同一质荷比而速度不同的离子聚焦在同一点上,不同质荷比的离子聚焦在不同的点上,将它们分别聚焦而得到质谱图,从而确定其质量。
【答案解析】