问答题
用于分离蛋白质的密度梯度常用蔗糖制备,而氯化铯密度梯度更常用于核酸分离。试分析其原因,并讨论氯化铯密度梯度超离心的应用效果。
【正确答案】①与蛋白质相比,核酸分子密度大,黏度大;②与蔗糖相比,氯化铯溶解度大,可制成高浓度、高密度的溶液;氯化铯黏度小,易扩散,有利于核酸的分离。因此,氯化铯密度梯度更常用于核酸分离。
核酸样品经过氯化铯密度梯度离心后,各成分按自身密度不同分别处于离心管的不同位置。就不同大分子来讲,RNA密度>DNA密度>蛋白质密度,因此,超离心后RNA位于离心管最下方,蛋白质位于最上层,DNA分子位于中间。就不同构象的DNA而言,其分子密度表现为:超螺旋DNA>线性DNA;对于同种DNA分子来讲,单链DNA密度大于双链DNA密度;对于G-C含量不同的DNA,G-C含量越高,核酸分子密度越大。可见这些样品都可以选用氯化铯密度梯度超离心法进行分离。
【答案解析】