(1)染色质免疫共沉淀的技术原理
染色质免疫共沉淀(ChIP)技术是一项新发展的研究活体细胞内染色质DNA与蛋白质相互作用的技术,利用抗原抗体的特异性识别反应来沉淀复合物,从而富集与目的蛋白相结合的DNA片段,并以此进行PCR检测并获得该蛋白质与DNA相互作用的信息,包括具体的DNA序列特征、位置、结合时问、亲和程度以及对基因表达的影响等。
(2)染色质免疫共沉淀的操作步骤
①在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物,并通过超声波或酶处理将其随机切断为一定长度的染色质小片段;
②通过抗原抗体的特异性识别反应,沉淀该复合体,从而富集与目的蛋白相结合的DNA片段;
③对目的片段进行纯化及PCR检测,获得该蛋白质与DNA相互作用的信息,包括具体的DNA序列特征、位置、结合时问、亲和程度以及对基因表达的影响等。
如图所示: