【正确答案】高等动、植物组织中含有不同类型的细胞且结合在一起,因此在分离之前,首先应破坏细胞外基质和细胞连接,制得单细胞悬液,然后进行分离纯化,得到单一类型的细胞。其具体做法是:用蛋白水解酶(胰蛋白酶)和钙螯合剂EDTA处理细胞,再轻度机械破坏,即可得到单细胞悬液。从混合细胞群体中分离不同类型细胞的方法有离心分离法、亲和分离法和流式细胞仪分离法等。
离心法的原理是:不同种类的细胞,其大小、形态、密度、质量等物理性质不同,在离心力的作用下,它们具有不同的沉降速率,从而得以分离。
亲和分离法的原理是利用了一些细胞对玻璃或塑料具有较强的亲和力的特点,使它们与其他细胞分开。还可利用抗体特异性结合的方法分离细胞,即先用仅与待分离细胞表面结合的抗体将其偶联到塑料或其他载体表面形成亲和表面,再使含待分离细胞的细胞悬液接触亲和表面,使待分离细胞与抗体结合而留在亲和表面,最后,利用轻微震荡的办法将被粘附的细胞回收起来。也可用酶(如胶原酶)来消化分解基质(如胶原),回收已分离的细胞。
流式细胞仪分离法是最精确的细胞分离技术,其原理是:先用结合有荧光染料的抗体标记待分离细胞,再将细胞悬液注入流式细胞仪,在该仪器中,细胞悬液被加压后从小孔径的喷嘴喷出后又经超声震荡作用变成含单个细胞的一连串液滴。当细胞经过激光束时根据其是否发荧光(即是否被荧光标记)而被充以负电荷或正电荷,最后当液滴通过强电场时,携带不同电荷的液滴分别朝不同方向偏转进入不同的分选收集容器中,这样获得要分离的细胞。
【答案解析】