什么是FISH技术?如何利用它来构建基因组的物理图谱?
 
【正确答案】(1)FISH技术定义 FISH技术即荧光原位杂交技术,是指根据核酸分子碱基互补配对的原则,用特殊的荧光素标记DNA探针,然后在染色体、细胞或组织切片标本上进行DNA杂交,来检测细胞内DNA或RNA特定序列是否存在的一种非放射性原位杂交方法,具有安全、快速、检测的信号强、杂交特异性高和可多重染色等特点。 (2)利用FISH技术构建基因组物理图谱的方法 用FISH技术可直接检测DNA在染色体上的位置,所确定的位置是基因在染色体上实际的物理位置。 ①FISH技术构建基因组物理图谱的实验流程为:FISH样本制备、探针制备、探针标记、杂交、染色体显带、荧光显微镜检测。 例如可选用分裂期细胞染色体为标本,分裂中期的染色体处于高度浓缩状态,有可分辨的染色体带型及明显的着丝粒位置,通过测定原位杂交所显示的荧光信号所处的位置与染色体短臂末端的相对距离,经过比例换算,可将分子标记标定在连锁图上。由于细胞分裂中期染色体高度压缩,分辨率较低,要求两个分子标记之间至少需间隔1Mb。 ②FISH技术和RFLP结合,可以精确地描述染色体核型,染色体长、短臂等结构的改变以及染色体复杂片段的性质。在基因图谱绘制中,FISH和linkage mapping结合起来,能较精确地确定具有高度多形态的基因位点。
【答案解析】