结构推理
何谓“退火”?DNA样品在水浴中加热到一定温度,然后冷却至室温测其OD260,请问在下列两种情况下“退火”后与加热前OD260的变化有什么不同?为什么?①加热的温度接近该DNA的Tm值;②加热的温度远远超过DNA的Tm值。
【正确答案】所谓退火,是指热变性的DNA在缓慢冷却的条件下重新形成双链的过程。由于变性DNA在260nm波长下的紫外吸收增加,即存在“增色效应”,据此可以判断:
在第一种情况下退火后的OD260与加热前会完全相同。因为在接近Tm值的温度时,DNA的两条链并未完全分开,所以退火DNA复性可以达到变性前的程度。
在第二种情况下,退火后OD260会比加热前高。因为在加热温度远远超过该DNA的Tm值时,DNA的两条链已完全分开,退火DNA复性不容易达到变性前的相同程度。
【答案解析】