问答题
假若你新发现一个新的细胞膜蛋白,通过序列分析提示为一个多次跨膜蛋白。为了确定跨膜次数及其末端朝向,你在细胞内高表达了该蛋白,然后通过免疫荧光术去标记细胞。然而当你用抗N端抗体直接标记活细胞时,出现膜上荧光,而用抗C端抗体时却没有。用甲醇固定细胞(此时细胞膜被破坏)后,则两种抗体都出现膜上荧光标记。于是将细胞膜分离纯化,然后用蛋白酶充分降解膜外部分,再经SDS-PAGE和银染,发现有10条主带,其中三条在对照细胞(即仅转染了空质粒载体的细胞)的相应样品中也有。如果先用蛋白酶处理,再分离细胞膜,那么,你会发现6条主带,对照样品也有其中的两条。从以上实验结果,试分析该多次跨膜膜蛋白的结构特点。
【正确答案】[题解仅供参考]实验结果分析:(1)用抗N端抗体直接标记活细胞时,出现膜上荧光,而用抗C端抗体时却没有出现膜上荧光。说明所研究的膜蛋白多态链的N端在胞外,C端在胞内。
(2)将细胞膜分离纯化,然后用蛋白酶充分降解膜外部分,再经SDS-PAGE和银染,发现有10条主带,其中三条在对照细胞(即仅转染了空质粒载体的细胞)的相应样品中也有。说明所研究膜蛋白极有可能是7次跨膜的多肽链,另外的三次跨膜结构是质粒载体自身核苷酸序列表达的。
(3)如果先用蛋白酶处理,再分离细胞膜,发现了6条主带,而对照样品有其中的两条。说明多肽链在胞内由四部分组成(三个环状结构域+C端部分),另外的胞内结构区域是质粒载体自身核苷酸序列表达的。
(4)综上所述:所研究的膜蛋白多肽链的N端在胞外,C端在胞内;多肽链是7次跨膜形成的,在胞内和胞外分别有三个环状结构域,其结构模型与7次跨膜的G蛋白偶联受体极其相似。
【答案解析】