【正确答案】
【答案解析】首先要有一种或几种检测或鉴定外源基因表达产物的方法,然后,在每一次分离纯化后检测表达产物存在哪一个级分中。
(1)用硫酸铵或乙醇分级沉淀,可根据蛋白质的溶解度的差别进行分离。
(2)SDS-PAGE、凝胶过滤、超离心,以及超滤可对分子质量不同的蛋白质进行分离。
(3)对带电行为不同的蛋白质可以用离子交换层析、等电聚焦、圆盘电泳、毛细管电泳等方法进行分离;但是在使用这一类型的方法时选择溶液的pH至关重要,因为蛋白质的带电行为和溶液的pH密切相关。
(4)如果具备表达产物的抗体,则可以使用亲和层析或免疫沉淀的方法简捷地分离所需的表达产物。
(5)使用吸附量较大的离子交换层析和亲和层析,以及对饱和硫酸铵或聚乙二醇反透析,还有冷冻干燥方法都可以达到浓缩样品的目的,然而这些方法使用时,都存在着拖延或除去小分子化合物的问题。相比而言,选用合适截留分子质量的正好超滤膜,进行超过滤,往往能同时达到浓缩样品和去盐(包括小分子)的目的。
(6)在上述的(2)和(3)这两大类用于分离纯化产物的过程,实际上也有样品纯度鉴定的作用。此外,末端分析、质谱和反相的HPLC层析也都是有效的样品纯度鉴定的方法。