问答题 二氢叶酸还原酶缺陷型(dfr-)仓鼠细胞株用质粒转化,该质粒含dfr-结构基因,并与激素诱导基因的启动基因以及另一个在本系统是显性选择标记的基因xgp相连。转化细胞根据合成Xgp的能力进行选择。所有这些挑选的细胞也都能合成Dfr。用剂量递增的氨甲蝶呤处理细胞。选择出一株细胞,比出发的转化细胞对氨甲蝶呤的抗性高200倍,同时Dfr酶含量也高200倍。
【正确答案】通过Cot分析测量基因数目,并通过杂交方法测量mRNA的丰富度。由于你把基因连到不同启动子上,你会对增强子的转录感兴趣。
【答案解析】
【正确答案】在没有氨甲蝶呤下培养细胞,观察细胞分裂中是否有多余的外拷贝被稀释去除(非复制性染色体外DNA的一个特征)。或者也可采用Southern转移方法来寻找同时含质粒和胞内序列的大段DNA。
【答案解析】
【正确答案】基因扩增常以大段DNA扩增的形式发生,这样除两类基因外一个基因将扩增。提出质粒的xgp部分,并用做Southern转移实验中的探针,这一过程可用于扩增出任一与dfr基因相连的基因。
【答案解析】