【正确答案】正确答案：(1)原理。核苷、核苷酸、核酸的组成成分中都有嘌呤、嘧啶碱基，这些碱基都具有共轭双键(-C-C=C-C=C-)，在紫外光区的250一280nm处有强烈的光吸收作用，最大吸收值在260nm左右。常利用核酸的紫外吸收性进行核酸的定量测定。核酸的摩尔消光系数(或称吸收系数)用来表示，为每升溶液中含有1克原子核酸磷的光吸收值(即A)。从A ₂₆₀ ／A ₂₈₀ 的比值可判断样品的纯度。纯RNA的A ₂₆₀ /A ₂₈₀ ≥2．0；DNA的A ₂₆₀ ／A ₂₈₀ ≥1.8。当样品中蛋白质含量较高时，则比值下降。RNA和DNA的比值分别低于2．0和1．8时，表示此样品不纯。蛋白质也有紫外吸收，通常蛋白质的吸收高峰在280nm波长处，在260nm处的吸收值仅为核酸的1／10或更低，因此对于含有微量蛋白质的核酸样品，测定误差较小。若待测的核酸制品中混有大量的具有紫外吸收的杂质，则测定误差较大，应设法除去。不纯的样品不能用紫外吸收值作定量测定。测得未知浓度核酸溶液的A ₂₆₀ nm值，即可以计算出其中RNA或DNA的含量。 (2)试剂和器材。试剂包括：①钼酸铵．过氯酸沉淀剂：取3．6mL 70％过氯酸和0．25g钼酸铵溶于96．4mL蒸馏水中，即成0．25％钼酸铵-2．5％过氯酸溶液；②5％～6％氨水：用25％～30％氨水稀释5倍。材料：酵母RNA干粉。 (3)步骤： ①准确称取待测核酸样品0．5g，加：少量0．0lmol／L NaOH调成糊状，再加适量水，用5％～6％氨水调至pH 7．0，定容至50mL；②取两支离心管，甲管加入2mL样品溶液和2mL蒸馏水，乙管加入2mL样品溶液和2mL钼酸铵一过氯酸沉淀剂。混匀，在冰浴上放置30min；③在3000 r／min下离心10min。从甲、乙两管中分别吸取0．5 mL上清液，用蒸馏水定容至50mL。选择厚度为1cm的石英比色杯，在260nm波长处测定A值；④测定A ₂₈₀ 的值。求出A ₂₆₀ ／A ₂₈₀ ，判断核酸的纯度：纯RNA的A ₂₆₀ ／A ₂₈₀ ≥2．0；DNA的A ₂₆₀ ／A ₂₈₀ ≥1．8。 式中，△A ₂₆₀ 为甲管稀释液在260nm波长处A值减去乙管稀释液在260nm波长处A值；L为比色杯的厚度，cm；N为稀释倍数；0．024表示每毫升溶液内含1μgRNA的A值；0．020表示每毫升溶液内含1μgDNA的A值。