【正确答案】大致经历的过程分为三个阶段:
(1)改造质粒的复制特性和可选择性。
早期对质粒载体的改造主要是将选择标记引入含pMB1(或ColE1)复制子的质粒中。
(2)调整载体的结构,提高载体的效率。
一方面将载体的长度减至最小,而另一方面则同时扩充载体容纳外源DNA片段的能力,以便于接受用各种各样的限制酶切割后产生的片段。
质粒载体越小越受欢迎,原因是:首先转化效率与质粒的大小成反比,而当质粒大于15kb时,转化效率将成为限制因素。因此,质粒越小,可以容纳的外源DNA的区段就越长。其次,质粒越大,就越难于用限制酶切割来进行鉴定,因为分子质量大,酶切位点就多。再者,由于质粒越大,复制的拷贝数就越低,因而,外源DNA的产量有所降低。
(3)质粒中引入多种用途的辅助序列。
引入的序列包括:可通过组织化学检测方法肉眼鉴定重组克隆的选择标记、产生用于序列分析的单链DNA功能元件、体外转录外源DNA序列、重组克隆的正选择和外源蛋白质的大量表达的序列等。
【答案解析】