问答题 实验设计:为了研究某种特异蛋白在细胞中的定位,可以借助免疫荧光技术或免疫电镜技术。请比较免疫荧光技术和免疫电镜技术各自的优点与不足?并说明免疫电镜技术详细实验步骤(以辣根过氧化物为标记物)。
【正确答案】
【答案解析】①优点与不足:
免疫荧光技术:制样简单快捷,灵敏,有特异性,但分辨率不足。
免疫电镜技术:分辨率高,可同时观察细胞超微结构和蛋白质定位。但制样步骤复杂,抗原易失活。
②免疫电镜技术详细实验步骤:取样→固定→脱水→环氧树脂包埋→超薄切片。
特异蛋白的抗体准备→辣根过氧化物标记抗体→超薄切片在孵育液中孵育(孵育液含DAB,酶标记抗体等)→四氧化锇后固定→电子染色→电镜观察。