问答题 TFⅢA是5S rRNA基因表达所需的转录因子,这个蛋白含有9个锌指结构域,与5S rRNA基因内的一段序列和5S rRNA本身结合。

问答题 如何定位TFⅢA蛋白的DNA结合位点?
【正确答案】分离一个带有5s rRNA基因的限制性片段。用多核苷酸激酶标记两个5'末端,用限制性内切酶切割其中一个标记末端。用纯化过的TFⅢA结合于DNA上,然后用DNase Ⅰ处理,在胶上分析切割产物,蛋白质结合的位置就是DNA上没有被消化的区域。实验中需要设计一个不加蛋白质的对照,并且要确定DNaseⅠ的浓度。
【答案解析】
问答题 什么样的突变可以证明锌指是DNA结合所需要的?
【正确答案】能使锌结合能力丧失的突变体。
【答案解析】
问答题 有人发现TFⅢA C端缺失19个氨基酸后与DNA结合的能力与野生型一样,但是不能激活5S rRNA基因的转录,解释其中的原因。
【正确答案】这些氨基酸的缺失并不影响DNA结合结构域,但缺少了转录激活结构域,所以虽然与DNA结合的能力与野生型一样,但是不能激活5S rRNA基因的转录。
【答案解析】