细胞周期同步化有哪些方法?比较其优缺点?
 
【正确答案】细胞同步化是指自然的,或经人为选择或诱导产生的细胞周期同步化。前者称为自然同步化,后者称为人工同步化。自然同步化是自然界存在的现象,在动、植物细胞都有发现。它们不受人为条件的干扰,因而有可能在接近自然的条件下进行观察。由于自然同步化的细胞群体受到诸多条件的限制,因而促进了细胞培养的各种人工同步化方法的发展。所以,人工同步化比较普遍使用的是体外培养细胞,大致可分为选择同步化、诱导同步化或者两者的结合。 (1)选择同步化:主要是有丝分裂选择法。经单层培养可获得一定数量的M期细胞。单层培养于培养器皿中的细胞使之处于对数期增殖,此时细胞分裂活跃,分裂指数高,分裂细胞变圆、隆起,与培养器的黏着性降低。此法的优点是不受药物影响,同步化程度高。缺点是分离的细胞少。 另一个方法是密度梯度离心法:根据不同时期的细胞在体积和重量上存在的差别进行分离。此法的优点是简单省时,效率高,成本低。缺点是对大多数种类的细胞并不适用。 (2)诱导同步化: ①DNA合成阻断法:用DNA合成抑制剂可逆地抑制DNA合成而不影响其他各期细胞沿细胞周期运转,最终将细胞群体阻断在S期。TdR双阻断法最常用,细胞最终阻断于G1/S交界处。优点是同步化效率高,几乎适合与所有体外培养的细胞体系。缺点是诱导过程可造成细胞非均衡生长。②中期阻断法:利用秋水仙素等抑制有丝分裂器的形成,将细胞阻断在有丝分裂中期。此法的优点操作简便,效率高。缺点是这些药物的毒性相对较大。
【答案解析】