结构推理 何谓PCR技术?简述其原理、应用及派生的PCR相关技术。
【正确答案】PCR技术是指在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷酸存在下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。反应分三步:(1)变性;(2)退火;(3)延伸。
   PCR技术在生命科学领域里的应用相当广泛:(1)遗传疾病的诊断;(2)癌基因的检测;(3)在法医学上的应用;(4)在分子生物学上的应用等。
   基于对PCR基本原理的认识和基本技术的掌握,相应地派生出了许多的新的相关技术和改良方法。
   (1)PCR-RELP技术:PCR-RFLP全称多聚酶链反应(PCR)一限制性片段长度多态性分析。PCR-RFLP主要有二个环节:①靶基因PCR扩增;②扩增的DNA片段限制性酶切图谱(长度多态性)。PCR-RFLP主要用于核酸变异性分析与比较。
   (2)PCR-SSCP技术:是聚合酶链反应一单链构象多态性分析(single strand conformation polymorphism)的简称,原理是将经扩增的DNA片段经过变性处理,形成单链,由于序列不同,单链构象就有差异在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳的迁移率不同,通过与标准物的对比,即可检测出有无突变,该技术已广泛应用于检测各种病原体基因的点突变及缺失突变,基因的多态性分析等。
   (3)不对称PCR直接测序法:在扩增反应中加入不等量的两段寡核苷酸引物,通过PCR扩增获得单链DNA,然后利用双脱氧法直接测序,很容易确定群体中某一特定基因的序列变异情况,这种方法是了解目的基因突变的最理想方法。
   (4)原位PCR技术:即聚合酶原位扩增技术,是将PCR技术与原位杂交技术结合起来,不改变与周围组织的原有位置关系,直接在组织、细胞或病原体原位研究基因变化的技术。该技术已经在神经性疾病,肿瘤、微生物病原体等多种检测中得到广泛应用。
【答案解析】