问答题
以硝酸纤维素滤膜(nitrocellulose filter membrane)作为杂交的固相支持物具有哪些优、缺点?
【正确答案】优点:
(1)硝酸纤维素滤膜具有较强的吸附单链DNA和RNA的能力,特别在高盐溶液中,结合能力达到80~100μg/cm2。
(2)杂交信号本底较低。由于硝酸纤维素滤膜非特异性吸附蛋白质的能力较弱,因此特别适合于那些涉及蛋白质作用(如抗体和酶等)的非放射性标记探针的杂交体系。
缺点:
(1)它同DNA的结合仅是靠疏水性的相互作用,所以并不十分牢固,在洗膜时,特别是在高温条件下洗膜,DNA会慢慢脱落,因而影响杂交效率。
(2)硝酸纤维素滤膜容易碎裂,操作不方便。
(3)硝酸纤维素滤膜在低盐浓度下同DNA结合的能力不强,因此不适宜电转移印迹法。
(4)硝酸纤维素滤膜对于小分子质量的DNA片段(特别是小于200bp的DNA片段)结合能力不强。
【答案解析】