结构推理 分离DNA和RNA主要有哪些方法?其原理是什么?
【正确答案】DNA的分离方法有:
   (1)浓盐法
   A.利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1M氯化钠抽提,得到的DNP粘液与异戊醇一氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95/%乙醇可将DNA钠盐沉淀出来。
   B.也可用0.15M NaCl液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1M NaCl提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿-异戊醇法除去蛋白。
   两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些。
   C.以稀盐酸溶液提取DNA时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂。通常用0.15M NaCl,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA。
   (2)阴离子去污剂法
   用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA。由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA。
   (3)苯酚抽提法
   苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA。此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态。
   (4)水抽提法
   利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液。在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M。加入2倍体积95/%乙醇,立即用搅拌法搅出。然后分别用66/%、80/%和95/%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品。此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用。为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS。
   RNA的分离方法主要步骤:材料的裂解,杂质的去除,RNA的吸附或沉淀。分离过程中使用的异硫氰酸胍,亚硫氢胍,巯基乙醇,N-月桂肌氨酸等使细胞及核蛋白复合物变性,释放RNA,有效抑制核酸酶。苯酚,氯仿,异戊醇抽提去除杂物,使DNA及蛋白沉淀到有机相。
【答案解析】