【正确答案】(1)天然质粒存在着缺陷,必须对之进行改造构建:
①加入合适的选择标记基因,通常是抗生素基因。
②增加或减少合适的酶切位点,便于重组。
③缩短长度,切去不必要的片段,提高导入效率,增加装载量。
④改变复制子,由严紧变为松弛型,以增加拷贝数。
⑤加装特殊的基因元件。
(2)DNA体外重组的基本过程:典型的DNA重组实验通常包含以下几个步骤:
①目的基因的提取:供体生物基因或称外源基因的提取
②限制性酶切:目的基因切成不同大小的片段
③酶接:连接到另一DNA分子上(克隆载体)
④转化:将这个重组DNA分子转入受体细胞
⑤筛选和鉴定:对吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定
⑥基因表达:对含有重组DNA的细胞进行大量培养,检测外援基因是否表达。
【答案解析】[考点]质粒的构建和DNA重组实验的步骤。