【答案解析】通常先用胃蛋白酶水解带有二硫键的蛋白质。胃蛋白酶专一性低，生成的肽段小，容易分离和鉴定，特别原因是因为酸性条件二硫键比较稳定。然后用对角线电泳分离肽段。将混合物点到滤纸的中央，在pH6.5进行第一次电泳，然后用过甲酸蒸汽断裂二硫键，使含二硫键的肽段变成一对含半胱氨磺酸的肽段。将滤纸旋转90°后在相同条件下进行第二次电泳，用茚三酮显色，多数肽段迁移率不变，处于对角线上，而由于断裂二硫键形成的含有半胱氨磺酸的肽段因负电荷增加而偏离对角线。
分离出含二硫键的肽段，并拆开二硫键，将两个肽段分别测序，最后与整个多肽链比较，即可确定二硫键的位置。