问答题
已知一个cDNA3"端的部分序列,请设计实验流程得到该基因的全长cDNA。
【正确答案】
【答案解析】
提取RNA,以oligo dT在M-MLV反转录酶的作用下引导反转录合成cDNA,用TdT在合成的cDNA末端加上poly C尾,在反应体系中加1.0μL的TdT于37℃反应15min以加尾的dC-cDNA为模板,用接头引物Adapter dG分别和基因特异性引物进行PCR,扩增基因5"末端。将5"端的扩增片段克隆到pMD18-T simple载体上,转化大肠杆菌E.coli Top10F感受态细胞,阳性转化子经PCR筛选后测序。
提交答案
关闭