【正确答案】病害标本的采集
(1)采集工具。采集标本应准备的工具和材料有:标本夹、标本箱、塑料袋、小玻管、标本袋、标签、记录本、铅笔、记号笔、小土铲、刀、锯、剪、锄等。
(2)紧密联系采集地的地理生态条件。病害的发生条件、病原物的生物特性等要联系采集地的地理生态条件来考虑,如采集鞭毛菌门真菌,应在潮湿低洼的地方或易积水结露的部位寻找;寄生性种子植物应与寄主相联系,列当在高纬度地区的双子叶草本植物上寄生,独脚金在低纬度地区的单子叶植物上寄生,槲寄生类则在木本植物的茎秆上寄生;表现萎蔫的植株要连根挖出,有时还要连同根际的土壤等一同采集。对于粗大的树枝和植株,则宜削取一片或割取一截。有些野生植物上的病害症状很特殊,采集时一定要连同植株的枝叶或花一起采集,以便鉴定其寄主名称。
(3)取样部位。标本上有子实体的应尽量在老叶上采集,因为它比较成熟,许多真菌有性阶段的子实体都在枯死的枝叶上出现,而无性阶段子实体大多在活体上可以找到。柔软多汁的子实体或果实材料,则应采集新发病的幼果。病毒病应尽量采集顶梢与新叶。线虫病害标本应采病变组织,危害根部的线虫病害标本除采集病根外还应采集根同土壤。
(4)完整的记录。完整的记录与标签同样十分重要,包括寄主名称、采集日期与地点、采集者姓名、生态条件和土壤条件等。
病害标本的制作
从田间采回的标本,除一部分用作分离鉴定外,对于表现典型症状的病害的标本最好是先摄影然后再压制或浸渍保存。压制或浸渍的标本尽可能保持其原有形状,微小的标本可以制成玻片,如双层玻片、凹穴玻片或用其他小玻管、小袋收藏。
标本的摄影
通过摄影将病害症状的自然状况记录下来。使用彩色照相还能表现标本的真实色彩,效果更好。
标本的干燥保存
干燥法最简单,最经济,应用最广,适用于一般含水较少的茎、叶等病害标本的制作。将采集的标本夹在吸水纸中,同时放入写有采集地点、日期和寄主名称的标签,再用标本夹压紧后日晒或加温烘烤,使其干燥,干燥越快越能保持原有的色泽,标本质量亦越高。夏季采的标本在温湿度高的情况下,容易发霉变色,换纸宜勤,通常在压制的最初3~4d每天换纸1或2次(视标本含水多少及温湿度情况而定),以后每2~3d换1次,至完全干燥为止。在第1次换纸的同时,应将标本加以整理,因经初步干燥,标本变软易于铺展。烟草、蚕豆、梨、马铃薯的茎叶等很易发黑变色,都是很难保存颜色的标本,在制作过程中特别要注意快速干燥。需要保持绿色的干制标本,可先将标本在2/%~4/%硫酸铜溶液中浸24h,或经醋酸铜溶液(配方及方法见浸渍法中醋酸铜的浸渍法)处理后再压制。也可以在叶面抹一层液状石蜡后再压,可以保持鲜绿色2~3d。
浸渍法适于多汁病害标本的制作,如果实、块根或担子菌的子实体等,必须用浸渍法保存。浸渍液种类很多,有纯属防腐性的,亦兼有保持标本原色的,现介绍数种常用及效果较好的方法。
(1)防腐浸渍法。此类浸渍法仅能防腐而没有保色作用,如萝卜、甘薯等,不要求保色的标本,洗净后直接浸于以下溶液中。
①5/%甲醛浸渍液。
②亚硫酸浸渍液。1000ml水中加5/%~6/%亚硫酸15ml(一般市售的亚硫酸含量为5/%~6/%)或用亚硫酸钠10.5g、浓硫酸8ml、水500ml配成混合液(注意浓硫酸应沿着容器壁缓慢地往下倒入亚硫酸钠溶液中,以防液体溅出,灼伤)。
(2)保持绿色标本的浸渍液及浸泡法。
①乙酸铜保(绿)色浸渍法。往50/%的乙酸中逐渐加入乙酸铜结晶溶解至饱和作为母液(在1000ml的50/%乙酸中大约加入15g乙酸铜即可达饱和),使用时兑水稀释1~4倍(稀释倍数视标本颜色而异,色深者稀释倍数可小些,即使用的浓度可高一些)。将此液加热煮沸,投入标本,开始时标本的绿色被漂去,再经数分钟后标本又恢复绿色,此时立即将标本取出,用清水洗净,保存于5/%的甲醛溶液中,此法称为热处理。冷处理的办法是将标本置于上述稀释液中浸3h后标本褪色,再经72h后标本恢复绿色,此时将标本取出,取水冲净,保存于5/%的甲醛溶液中。此法保持色泽时间较长,其保色原理大致是铜离子与叶绿素中的镁离子发生置换作用。所以,溶液经多次处理标本后,铜离子会逐渐减少。如要继续使用,应补入适量的乙酸铜。此法保存标本往往略带蓝色,与植物标本原色稍有出入。
②硫酸铜保(绿)色浸渍法。用清水冲洗标本,直接浸泡在5/%的硫酸铜溶液中1~7d,待标本略带褐色时取出用清水漂洗,去除标本表面多余的硫酸铜溶液,然后保存在亚硫酸浸渍液中。
③保存黄色和橘红色标本的浸渍液。保存杏、梨、柿、红辣椒等果实标本用亚硫酸浸渍液,亚硫酸浸渍液有漂白作用。使用浓度一般为1/%即可(浸杏时浓度可再稀些),因浓度太小,防腐力不够,可加入适量乙醇。为了防止果实崩裂,可加入少许甘油。
④保存红色标本的浸渍液。保存标本红色较难,因为红色是水溶性的花青素,很难保存。常用Hesler浸渍液保存,成分是:氯化锌50g、福尔马林25ml、甘油25ml、水1000ml。
将氯化锌溶于热水中,加入甲醛,如有沉淀,用其澄清液。此溶液适用于由于花青素而显红色的标本,如苹果、番茄等。
标本的保存
制成的标本经过整理和登记后,依一定的系统排列和保藏。菌类标本一般按分类系统排列,除用计算机保存文档外,还要有两套索引卡片,一套是寄主索引,一套是菌类索引,以便于寻找和整理。标本室(柜)要保持干燥、清洁,并要定期施药以防虫蛀与霉变。
标本盒保藏。教学和示范用的干制病害标本,采用玻面纸盒保藏比较方便,玻面纸盒的适宜大小为20cm×28cm×2cm。纸盒中先铺一层棉花,并在棉花中加少许樟脑粉以驱虫,最后在棉花上放上标本和标签。
标本瓶保藏。浸渍的标本放在标本瓶内保藏。为了防止标本下沉和上浮,可绑在玻璃条上,然后再放入标本瓶。标本瓶的口盖好后滴加石蜡密封,然后贴上标签。
纸套内保藏。用牛皮纸叠成15cm×33cm的纸套,大量保存的干制标本,大多采用纸套保藏,将标本装入纸套内,并在纸套上贴好标签,放在标本柜中即可。
病害标本的鉴定
对于已有报道的病害,参考有关图谱和资料,对所采集的标本及时进行鉴定,定出属名和种名。对于新的病害,应遵循柯赫氏法则进行病害诊断。
【答案解析】