实验题
分离纯化某蛋白酶的主要步骤和结果如下表:
分离步骤
分离液体积/mL
总蛋白含量/mg
总活力单位/Iu
①离心分离
②硫酸铵盐析和透析
③离子交换层析
④亲和层析
1400
280
90
6
1000
3000
400
3
100000
96000
80000
45000
(1)根据上述结果,计算第②至④步骤中,每步骤的比活力和纯化倍数。
(2)亲和层析的原理是什么?
【正确答案】
(1)第②至④步骤的比活力和纯化倍数见下表: 分离步骤 比活力/(IU/mg蛋白) 纯化倍数 硫酸铵盐析和透析 离子交换层析 亲和层析 32 200 15000 3.2 20 1500 (2)亲和层析是一种基于蛋白质能与特定的配基专一性地结合,从而分离纯化蛋白质的方法。当含有待提纯蛋白质的混合样品通过亲和层析柱时,目的蛋白会与层析柱上的配基相结合,而其他蛋白将被缓冲液洗脱流出,然后通过改变洗脱条件,使目的蛋白从层析柱上释放,从而达到分离纯化的目的。
【答案解析】
提交答案
关闭