【正确答案】正确答案：影响因素主要有： (1)DNA纯度。污染在DNA制剂中的某些物质，例如蛋白质、酚、氯仿、酒精、乙二胺四乙酸(EDTA)、SDS(十二烷基硫酸钠)、以及高浓度的盐离子等，都有可能抑制核酸内切限制酶的活性。 (2)DNA的甲基化程度。在基因克隆中是使用失去了甲基化酶的大肠杆菌菌株来制备质粒DNA，其目的是为了避免被核酸内切限制酶局部消化，甚至完全不被消化。 (3)酶切消化反应的温度。DNA消化反应的温度，是影响限制内切酶活性的一个重要因素。不同的核酸内切限制酶，具有各自的最适反应温度。多数限制内切酶的最适反应温度是37℃，少数限制性内切酶的最适反应温度高于或低于37℃。 (4)DNA的分子结构。DNA分子构型对核酸内切限制酶的活性有很大影响，如消化超螺旋的DNA比消化线性DNA用酶量要高出许多倍。 (5)核酸内切限制酶的缓冲液。核酸内切限制酶的标准缓冲液的组分包括氯化镁、氯化钠或氯化钾、Tris-HCl、β一巯基乙醇或二硫苏糖醇(DTT)以及牛血清白蛋白(BSA)等。Mg ²⁺ 的作用是提供二价的阳离子。缓冲液Tris-HCl的作用在于，使反应混合物的pH恒定在酶活性所要求的最佳数值的范围之内。巯基试剂对于保持某些核酸内切限制酶的稳定性是有用的，而且还可保护其免于失活。