结构推理 试设计一个检测某细胞株中某一基因是否表达的简明技术路线。
【正确答案】若基因在细胞内表达,细胞中就会转录出大量的与该基因相对应的mRNA用于翻译蛋白质,因此研究基因是否表达可以检测细胞总mRNA中是否存在与该基因相对应的mRNA的存在。目前常用的方法是RT-PCR和Southern杂交相结合的方法。其基本步骤如下:首先将已知基因用荧光素标记制成探针;提取该细胞株的总RNA,通过RT-PCR反转录成cDNA;将产生的cDNA进行琼脂糖凝胶电泳进行分离,通过转膜,变性后杂交。如果该基因在细胞中表达,就会与探针结合,在荧光下就会产生信号,从而判断其是否表达。
【答案解析】