【正确答案】基本原理：利用λ噬菌体进行位点特异性DNA片段重组，通过整合与切除反应，实现基因快速克隆和载体间平行转移。 Gateway大规模克隆技术包括TOPO反应和LR反应两步。基本操作流程：TOPO反应将目的基因PCR产物连入Entry载体，载体上的CCCTT被拓扑异构酶所识别，通过与切口处的磷酸基团形成共价键，将该酶偶联在载体上。5'GTGG粘性末端攻击PCR产物的互补性末端并与接头序列CACC退火，使PCR产物以正确方向连入Entry载体。LR反应将目的片段从Entry载体中重组入表达载体，Entry载体上基因两端具有attL1和attL2位点，目的载体上含有attR1和attR2位点，在重组蛋白的作用下发生定向重组，形成新的位点attB1和attB2，将目的基因转移到表达载体中。