新克隆出一个植物蛋白基因,对其序列和结构域进行生物信息学分析后推测该蛋白可能以多亚基形式存在。请问:试图利用SDS-PAGE从混合蛋白质样品中分离、鉴定出可能存在的蛋白质复合体是否可行?为什么?请指出2种能分离蛋白质复合体的生物化学方法。
 
【正确答案】①不可行。 ②SDS-PAGE为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,在电泳样品制备过程中需要添加SDS和巯基乙醇,属于变性电泳。SDS即十二烷基硫酸钠,是一种蛋白质变性剂,它可以破坏蛋白质分子中的氢键和疏水作用;巯基乙醇是还原剂,可以破坏二硫键。在巯基乙醇存在下,SDS使蛋白质复合体中的各亚基分离,并且亚基多肽链充分展开,故SDS-PAGE只能分离蛋白质亚基。 ③凝胶过滤柱层析、密度梯度超离心等可用于分离蛋白质复合体。
【答案解析】SDS-PAGE;蛋白质亚基;天然蛋白质分离。 这个题提到基因克隆、生物信息学分析,这些都不是考点。实际上,是“为什么可以用SDS-PAGE测定蛋白质亚基分子量”、“比较SDS-PAGE与凝胶过滤柱层析技术应用特点”的另一种变形考题。除了凝胶过滤柱层析、密度梯度超离心外,其他的生物化学方法如非变性凝胶电泳、免疫共沉淀等都可以用于分离蛋白质复合体。