【正确答案】①Sanger反应所需要的主要试剂为2,4-二硝基氟苯(DNFB);DNFB在弱碱性条件下与多肽链N端氨基酸残基α-氨基反应形成DNP-肽; ②在对DNP-肽进行酸水解时,由于新形成的共价键比肽键稳定,水解产物中只有N末端氨基酸以“DNP-氨基酸”(黄色)形式存在,其他均为无色游离氨基酸,结合层析技术即可鉴定出多肽链N端氨基酸。 ③其他方法有:氨肽酶法、丹磺酰氯(或Edman降解法等)。 多肽链N末端分析方法很多,各有应用特点。氨肽酶是一类肽链外切酶,专门从N末端开始逐个水解肽键。通过控制酶反应速度,可以分离、鉴定N端氨基酸。实际上,由于酶反应速度很难严格控制,该法在应用中有较大局限性。丹磺酰氯是一种荧光试剂,能专一性地与多肽链N端的α-氨基发生反应,生成稳定的DNS-肽;肽键经酸水解释放出游离氨基酸,结合层析或电泳技术,即可鉴定出带荧光的DNS-氨基酸。相比之下,Edman降解法更有效。
【答案解析】[考点] 多肽链末端分析。