问答题 (中国药科大学2006年考研试题)在某一抽提液中含有三种蛋白质,其性质如下:蛋白质相对分子质量等电点A200008.5B210005.9C60006.5试设计设计两个方案来分离纯化这三种蛋白质。并说明实验原理。若你想得到一种有活性的酶,在提纯过程中应注意哪些事项?
【正确答案】正确答案:A和B的分子量相近,等电点差异较大,而它们与C的分子量差异较大,据此可采用以下方案分离纯化:①先根据分子量差异用凝胶过滤层析分离,再根据等电点差异采用离子交换层析分离。②先根据等电点差异采用离子交换层析分离,再根据分子量差异用凝胶过滤层析分离。 酶是生物催化剂,在提纯时必须尽量减少酶活力的损失,因此全部操作需在低温下进行,一般在0~5℃之间进行,用有机溶剂分级分离时必须在-15℃时行;为防止重金属使酶失活,提溶剂中加放EDTA;在整个分离提纯过程中不能过度搅拌,以免产生大量泡沫,而使酶变性。
【答案解析】