说出PCR的原理、PCR实验反应体系的组成成分和基本反应步骤。
 
【正确答案】(1)PCR技术的原理 根据碱基配对原理,在DNA聚合酶作用下,以单链DNA为模板,借助一小段双链DNA来启动合成,通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合,形成部分双链。在适宜的温度和环境下,DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3'—OH末端,并以此为起始点,沿模板5'→3'方向延伸,合成一条新的DNA互补链。 (2)PCR实验反应体系的基本组成成分 模板DNA、特异性引物、耐热性的DNA聚合酶(Taq DNA聚合酶)、四种dNTP及含有Mg2+的缓冲液。 (3)PCR的基本反应步骤 ①解链,即DNA变性。 通过加热至95℃使模板DNA完全变性为单链,同时引物自身和引物之间存在的局部双链也得以消除。 ②退火,即DNA复性。 模板DNA经加热变性成单链后,将反应温度下降至适宜温度,使两种引物分别与各自的单链模板DNA结合。 ③引物的延伸,即DNA新生链的合成。 将温度升至72℃,耐热性的DNA聚合酶以dNTP为原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。 上述三个步骤为一次反应循环,新合成的DNA分子又作为下一轮反应的模板。重复多次反应循环(一般25~30次)后,可使目的DNA片段的拷贝数扩增100万倍以上。
【答案解析】