【正确答案】正确答案：(1)天然人GM-CSF成熟基因5’端的碱基含量较高，且编码前几个氨基酸的密码子在大肠杆菌中表达很低。可以在编码成熟蛋白的基因序列前引入EcoR I酶切位点和启始密码子ATG，并在不改变蛋白氨基酸顺序的前提下，将核苷酸中的一些G和C改成A和T，降低了基因5’端的GC含量，又使改变后的密码子为大肠杆菌偏爱。以人外周血单核细胞获得的总RNA为模板，选择合适的特异性引物，进行PCR扩增反应得到修饰完整的人GM-CSF成熟肽基因序列。 (2)将扩增的PCR产物回收纯化，将人GM-CSF片段插入pMD18．T克隆载体的EcoR 1/Pst I酶切位点，转化大肠杆菌XL 10gold后提取质粒。用PCR反应鉴定含有插入片段的克隆，并挑取含有插入片段的克隆。经EcoRL／PstI双酶切鉴定后，进行序列分析。 (3)将PCR扩增并经测序鉴定成熟肽的人GM-CSF基因插入温度诱导型表达质粒pDH，得到表达载体pDH／rhGM-CSF，将pDH／rhGM-CSF转化入大肠杆菌。 (4)挑选克隆，接种培养并回收菌体，进行SDS-PAGE凝胶电泳分析。 (5)Western blot分析或活性测定。