【正确答案】首先要有一种或几种检测或鉴定外源基因表达产物的方法,然后,在每一次分离纯化后,检测表达产物存在哪一个级分中。 (1)用硫酸铵或酒精分级沉淀,可根据蛋白质的溶解度的差别进行分离。 (2)SDS-PAGE、凝胶过滤、超离心,以及超滤可对分子量不同的蛋白质进行分离。 (3)对带电行为不同的蛋白质可以用离子交换层析、等电聚焦、圆盘电泳、毛细管电泳等方法进行分离;但是在使用这一类型的方法时选择溶液的pH至关重要,因为蛋白质的带电行为和溶液的pH密切相关。 (4)如果具备表达产物的抗体,则可以使用亲和层析或免疫沉淀的方法简洁地分离所需要的表达产物。 (5)使用吸附量较大的离子交换层析和亲和层析,以及对饱和硫酸铵或聚乙二醇反透析,还有冷冻干燥等方法都可以达到浓缩样品的目的,然而这些方法使用时,都存在着脱盐或除去小分子化合物的问题。相比而言,选用合适截留分子量的超滤膜,进行超过滤,往往能同时达到浓缩样品和去盐(包括小分子)的目的。 (6)上述的(2)和(3)这两大类用于分离纯化产物的过程,实际上也是有样品纯度鉴定的作用。此外,末端分析、质谱和反相的HPLC层析也都是有效的样品纯度鉴定的方法。但是应注意,样品的纯度是一个相对的概念。
【答案解析】