结构推理 你对应用RACE技术克隆cDNA的5'末端和3'末端的原理有怎样的了解?
【正确答案】(1)5'RACE
   ①在反转录酶的作用下,以已知基因片段内部特异性引物启始cDNA第一条链的合成。
   ②RNase混合物降解模板mRNA,纯化cDNA第一条链。
   ③用末端转移酶在cDNA链3'端加入连续的dCTP,形成oligo dC尾巴。
   ④以连有oligo dG的锚定引物和基因片段内部特异的nested引物进行PCR扩增,以期得到目的片段,并可用nest PCR进行检测。
   (2)3'RACE
   ①在反转录酶的作用下,以连有可以和:poly A配对的oligo dT的锚定引物启始cDNA第一条链的合成。
   ②用RNase H降解模板mRNA。
   ③用通用锚定引物和基因片段内部特异引物进行PcR扩增得到目的3'片段,并可用nest PcR的方法继续进行检测和扩增。
【答案解析】[考点]RACE技术。RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术是用于从已知cDNA片段扩增全长基因的方法,它根据已知序列设计基因片段内部特异引物,由该片段向外侧进行PCR扩增得到目的序列。用于扩增5'端的方法称为5'RAcE,用于扩增3'端的称为3'RACE。