结构推理 简介DNA聚合酶Ⅰ和Klenow大片段的结构与功能。
【正确答案】DNA聚合酶Ⅰ的结构与功能:占DNA聚合酶Ⅰ蛋白2/3的C端区域,相对分子质量68000,具有DNA聚合酶活性和3'→5'核酸外切酶活性,既可合成DNA又可降解DNA,保证DNA复制的准确性;占DNA聚合酶Ⅰ蛋白1/3的N端区域,相对分子质量35000,具有5'→3'核酸外切酶的活性,可作用于双链DNA,又可水解5'端或距5'端几个核苷酸处的磷酸二酯键。DNA聚合酶Ⅰ在DNA直接修复、除去冈崎片段5'端RNA引物方面有重要作用。
   Klenow大片段是用蛋白酶水解DNA聚合酶Ⅰ所得的大片段区域,具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'核酸外切酶活性,在基因工程中有广泛的应用,主要有:修复反应、制备平末端;标记DNA3'突出末端;双脱氧末端终止法进行DNA序列分析;用于cDNA第二链的合成;定点突变中用于合成第二链;用引物延伸法制备单链DNA探针等。
【答案解析】[考点]DNA聚合酶Ⅰ的结构与功能。DNA聚合酶Ⅰ是第一个被鉴定出来的DNA聚合酶,用蛋白酶水解后,可以得到两个片段,大片段即为Klenow,具有外切酶和聚合酶活性,小片段之具有外切酶活性。