四个对照组的作用

对照1：该组实验所培养的大肠杆菌除了没有接受外源DNA外与其他组大肠杆菌状态一致，为空白对照组。

对照2：研究只转入了载体的大肠杆菌体内载体克隆数量。

对照3：该组实验研究的是闭环质粒和开环质粒共同存在的情况下，大肠杆菌体内载体克隆数量。

对照4：该组实验研究的是只有开环质粒导入大肠杆菌中的质粒的克隆数量。

碱性磷酸酶的作用

防止质粒载体DNA的自连作用。

因为有5＇磷酸的存在，DNA片段才能和另一端的3＇－OH发生脱水缩合反应，也就是自连作用。碱性磷酸酶可以去除DNA断裂处的5＇端的磷酸基团。用碱性磷酸酶处理切开的载体后不会发生缩合反应，因此用碱性磷酸酶处理可以防止质粒载体DNA自连的作用。

①第三组实验数据较为合理。

②原因：

a．对照1没有转入任何外源基因，克隆数应该为0；

b．对照2中载体未被酶切，没有任何损伤，按照DNA正常复制次数，其克隆数大于1000也合理；

c．对照3载体未用碱性核酸酶处理，部分质粒发生自连，其克隆数应该小于对照2的实验数据；

d．对照4用碱性核酸酶处理，质粒载体发生自连的概率较小，只有部分质粒之间相互连接，其克隆数量应该小于对照3；

e．实验组中载体未发生自连，只有部分质粒与cDNA连接，故其克隆数量和对照4相差无几。

综上可知，第三组实验数据较为合理。

③其他次实验失败的原因

实验一中所有克隆数量均较多，应该是LB平板中氨苄青霉素失效，只要有DNA存在即被克隆；

实验二中所有克隆数均为0，可能是大肠杆菌感受态制备失败，并未有任何外源DNA转入大肠杆菌中。

设计实验鉴定克隆是否正确

①实验步骤

a．用EcoRI和EcoRV共同处理载体。

b．用EcoRI和EcoRV共同处理cDNA片段，然后与步骤（1）中的载体混合，加入DNA连接酶，在适当的条件下使cDNA片段与载体连接。

c．连接产物转化到大肠杆菌，并在含有氨苄青霉素的LB平板上生长。

d．设置4组对照：

对照1：在含有抗生素的平板上涂布未被转化的大肠杆菌感受态细胞。

对照2：用未被酶切处理的载体转化大肠杆菌感受态细胞，并在含有抗生素的平板上生长。

对照3：用EcoRI处理的载体，不用碱性磷酸酶处理，不加cDNA片段，然后加连接酶做连接反应，并转化大肠杆菌感受态细胞，并在含有抗生素的平板上生长。

对照4：除了用碱性磷酸酶处理外，其他同对照3。

e．做3组平行对照实验。

f．计算克隆数量。

②结果分析

如果本次实验结果克隆数量与原始实验结果相差不多，则证明原始实验的实验结果是正确的，反之还需再次做实验验证。