问答题 (华南农业大学2009年考研试题)今有以下四种蛋白质的混合物:(A)相对分子质量12000,pI10;(B)相对分子质量62000,pI4;(C)相对分子质量28000,pI7;(D)相对分子质量9000,pI5。若不考虑其他因素,当它们:(1)流过DEAE.纤维素阴离子交换柱,用缓冲液pH8.8和线性NaCl盐梯度洗脱时;(2)流经SephadexG-75凝胶过滤柱时,这些蛋白质的洗脱顺序如何?并简单说明原因.
【正确答案】正确答案:(1)在DEAE-纤维素阴离子交换柱层析中,蛋白质有不同的pI,在同一pH下,各种蛋白质所带的电荷的种类和数量不同,因此与离子交换剂的吸附作用的强弱不同。带负电荷少,吸附能力弱的先洗脱下来,带负电荷多,吸附能力强的后洗脱下来,从而将蛋白质混合物分开,据此分析可知四种蛋白质的洗脱顺序为:(A)、(C)、(D)、(B)。 (2)在Sephadex G-75凝胶过滤柱时,小颗粒(小分子质量)进入凝胶的孔内扩散,流动速度慢,后洗脱;大颗粒(大分子量)不进入凝胶的孔内,滑动速度快,先洗脱。据此分析可知四种蛋白质的洗脱顺序为:(B)、(C)、(A)、(D)。
【答案解析】