【正确答案】正确答案：以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。 cDNA文库的构建共分四步：①细胞总RNA的提取和mRNA分离；②第一链cDNA合成；③第二链cDNA合成；④双链cDNA克隆进质粒或噬菌体载体并导入宿主中繁殖。 (1)RNA的分离。cDNA文库构建是以mRNA为起始材料的，mRNA在总,RNA中所占比例很小，因此从总RNA中富集mRNA是构建cDNA文库和其他应用所必需进行的步骤。通过降低rRNA和tRNA含量，可大大提高筛选到目标基因的可能性。 目前纯化mRNA的方法都是在固体支持物表面共价结合固定一段由脱氧胸腺嘧啶核苷组成的寡聚核苷酸[oligo(dT)]链，由它与mRNA的Poly(A)尾巴杂交，从而吸附固定住mRNA，进而将mRNA从其他组分中分离出来的。 (2)cDNA第一链的合成。由mRNA到cDNA的过程称为反转录，是由反转录酶催化的。常用的反转录酶有两种，即AMV(来自禽成髓细胞瘤病毒)和MMLV(来自Moloey鼠白血病病毒)，二者都是依赖于RNA的DNA聚合酶，有5’-3"DNA聚合酶活性。合成DNA时需要引物引导，目前常用的引物主要有两种，即Oligo(dT)和随机引物。 (3)cDNA第二链的合成。即将上一步形成的mRNA—cDNA杂合双链变成互补双链cDNA的过程。cDNA第二链合成的方法有四种：自身引导合成法，置换合成法，引导合成法和引物．衔接头合成法。 (4)双链cDNA连接到质粒或噬菌体载体并导入大肠杆菌中繁殖。双链cDNA在和载体连接之前，要经过一系列处理，如同聚物加尾、加接头和分级分离。